人乳頭瘤病毒(HPV)16型、18型核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)

該試劑盒用于體外定性檢測(cè)女性宮頸細(xì)胞中的人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16型和18型的DNA核酸片段。

  • 產(chǎn)品品牌: REAGEN
  • 產(chǎn)品貨號(hào): RN102FP
  • 產(chǎn)品規(guī)格: 50/100T
  • 產(chǎn)品適用: 該試劑盒用于體外定性檢測(cè)女性宮頸細(xì)胞中的人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16型和18型的DNA核酸片段。
  • 產(chǎn)地來(lái)源: 深圳
  • 保質(zhì)期: 12個(gè)月

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng):人乳頭瘤病毒(HPV)16型、18型核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR)

【包裝規(guī)格】

50人份/

【預(yù)期用途】

該試劑盒用于體外定性檢測(cè)女性宮頸細(xì)胞中的人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV16型和18型的DNA核酸片段

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)結(jié)合Taqman技術(shù),對(duì)人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV16型和18的特異性DNA核酸片段進(jìn)行熒光PCR定量檢測(cè)。

【主要成分】

 

組分成分

50人份/

主要成分

規(guī)格

數(shù)量

 

HPV16 18反應(yīng)液

 

1020μL /

 

1

引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、緩沖體系

酶混合液

26μL /

1

Taq酶、UDG酶等

HPV16 18陽(yáng)性對(duì)照

250μL /

1

含靶基因的重組克隆

HPV16 18陰性對(duì)照

500μL /

1

生理鹽水

 【儲(chǔ)存條件及有效期】

試劑置于-30~-15避光保存,有效期為12個(gè)月。本產(chǎn)品反復(fù)凍融應(yīng)不超過(guò)5

【適用儀器】

熒光定量PCR儀:ABI 7500熒光PCR.;ABI Quantstudio5 ;Gentier 96RSLAN-96P全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)。

【樣本要求】

1. 適用樣本

女性宮頸拭子樣本

2. 采集方法

先用棉拭子將宮頸口過(guò)多的分泌物擦去,用擴(kuò)陰器擴(kuò)陰,再換取棉拭子伸入宮頸,通過(guò)上皮交界處,直到看不到拭子頭,旋轉(zhuǎn)10-20秒,取出拭子,將拭子置于無(wú)菌玻璃管中,密閉送檢。

3. 樣本運(yùn)輸和保存

樣本保存:待測(cè)樣本,可立即進(jìn)行核酸提取處理;如果樣本需要在24小時(shí)內(nèi)檢測(cè),可先置于2~8保存;如果樣本在24小時(shí)內(nèi)無(wú)法檢測(cè),則可置于-20~-80保存,盡量避免反復(fù)凍融,導(dǎo)致假陰性。

樣本運(yùn)輸:采用低溫運(yùn)輸,樣本運(yùn)輸應(yīng)遵守國(guó)家關(guān)于第二類(lèi)病原微生物的相關(guān)生物安全規(guī)定。

 【檢驗(yàn)方法】

1. 樣本處理

樣本試管中加入1ml生理鹽水,充分震蕩混勻,按照核酸提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行核酸提取,取待測(cè)樣本、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照200μL進(jìn)行后續(xù)提取。

2. 試劑配置(在準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行,與擴(kuò)增區(qū)分開(kāi),冰上操作

注:試劑使用前要完全解凍,使用前渦旋混勻,10000 rpm離心5 s,確保試劑完全離心至管底,否則會(huì)出現(xiàn)裝量差異的現(xiàn)象。

若有N個(gè)待檢測(cè)樣本,則需配置N擴(kuò)增反應(yīng),按下表要求進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)液的配制,配制完成后充分震蕩混勻,10000 rpm離心5 s。按每管15μL分裝至0.2 ml PCR管中,并做好標(biāo)記,擴(kuò)增反應(yīng)液需現(xiàn)配現(xiàn)用。


N人份(μL)

HPV16 18反應(yīng)液

N×19.5

酶混合液

N××0.5

總量

N××20

3. 加樣在樣品處理區(qū)進(jìn)行,冰上操作

按陰性質(zhì)控品、待測(cè)樣品、陽(yáng)性質(zhì)控品的加樣順序,分別取5μL,加入至已分裝擴(kuò)增反應(yīng)液的八聯(lián)管中,反應(yīng)總體系為25μL。蓋緊管蓋,短暫離心后置于熒光定量PCR儀中,并記錄樣本擺放順序。

4. 擴(kuò)增反應(yīng)(在擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行

選擇FAM通道檢測(cè)HPV 16核酸,選擇ROX通道檢測(cè)HPV 18型核酸,選擇CY5通道檢測(cè)內(nèi)標(biāo)。按以下擴(kuò)增程序表設(shè)置PCR擴(kuò)增參數(shù)。

步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

1

預(yù)變性

95

3min

1

2

變性

95

10sec

45cycle

3

退火延伸及熒光檢測(cè)

60

30 sec

報(bào)告熒光:FAM、ROX、CY5;淬滅熒光:NONE。

5.質(zhì)量控制


FAM通道Ct

ROX通道Ct

CY5通道Ct

陰性對(duì)照

UNDET

UNDET

陽(yáng)性對(duì)照

35

35

35

6.結(jié)果判讀

反應(yīng)結(jié)束自動(dòng)保存結(jié)果,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline Start 值、End 值以及Threshold 值(可以根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整,Start 值可以在3~15、End 值可設(shè)在5~20,調(diào)整陰性對(duì)照的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線),點(diǎn)擊Analysis 自動(dòng)獲得分析結(jié)果,在Report 界面觀看結(jié)果。


FAM通道

ROX通道

CY5通道

結(jié)果判定

1

Ct>40

Ct>40

Ct<35

陰性

2

Ct40

有或無(wú)擴(kuò)增曲線

HPV 16型 陽(yáng)性

3

Ct40

有或無(wú)擴(kuò)增曲線

HPV 18型 陽(yáng)性

4

Ct>40

Ct>40

Ct>35

復(fù)檢:重新取樣檢測(cè)

檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

1.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染,試劑污染,樣品交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,如陰性對(duì)照檢測(cè)為陽(yáng)性,則需做進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)來(lái)確認(rèn)是哪類(lèi)污染。如為試劑污染,需開(kāi)封新的試劑盒再次進(jìn)行實(shí)驗(yàn);如為樣品交叉污染,應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn);如為實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染,需對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行徹底清潔或更換實(shí)驗(yàn)室再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.試劑運(yùn)輸、保存或配制不當(dāng)會(huì)引起試劑檢測(cè)性能下降,出現(xiàn)假陰性結(jié)果。如陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)為陰性,應(yīng)開(kāi)封新的試劑盒再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

檢測(cè)方法的局限性

1. 該試劑盒僅為定性產(chǎn)品,不做定量測(cè)定。

2. 該試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考,對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀或體征、病史、其它實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

3. 當(dāng)樣本病毒含量低于最低檢出限時(shí),可能會(huì)出現(xiàn)假陰性。陰性結(jié)果僅說(shuō)明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測(cè)極限,但不能完全排除細(xì)菌感染的可能

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1.準(zhǔn)確性企業(yè)陽(yáng)性參考品檢測(cè)結(jié)果全部為陽(yáng)性,陽(yáng)性率為15/15

2.最低檢測(cè)限:該試劑盒HPV16型和HPV18型的最低檢測(cè)限500copies/mL。

注意事項(xiàng)

1.請(qǐng)嚴(yán)格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求在冰上操作。

2試劑配制建議在試劑配制區(qū)進(jìn)行,樣品處理要求生物安全柜內(nèi)操作。臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

3.反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感,應(yīng)避光保存。反復(fù)凍融可能降低試劑盒靈敏度,請(qǐng)按檢測(cè)頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存

4.反應(yīng)結(jié)束后,擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄,當(dāng)日清理,切忌開(kāi)蓋。

5.不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用,請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)使用試劑盒。

6. 本品僅用于體外診斷。


企業(yè)愿景

    公司將一如既往的視誠(chéng)信為最重要的文化精神;在經(jīng)營(yíng)決策和管理的全過(guò)程中信守“以產(chǎn)品質(zhì)量、優(yōu)質(zhì)服務(wù)”為原則和“為人類(lèi)健康服務(wù)”為宗旨的理念;融前沿科技、全球資源與優(yōu)質(zhì)人才為資本,以開(kāi)拓創(chuàng)新、銳意進(jìn)取、精益求精之精神,科學(xué)管理之導(dǎo)向,凝聚員工、客商之合力,同舟共濟(jì),為實(shí)現(xiàn)人類(lèi)的食品安全和生物醫(yī)藥業(yè)的高速發(fā)展不懈奮斗!

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