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產(chǎn)品品牌
: REAGEN -
產(chǎn)品貨號
: RN065FP -
產(chǎn)品規(guī)格
: 50/100T -
產(chǎn)品適用
: 對樣本中流感病毒H5N1亞型RNA進行檢測,適用于流感病毒H5N1型感染的輔助診斷及流行病學調查。 -
產(chǎn)地來源
: 深圳 -
保質期
: 12個月
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:流感病毒H5N1亞型核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
【包裝規(guī)格】
50人份/盒
【預期用途】
對樣本中流感病毒H5N1亞型RNA進行檢測,適用于流感病毒H5N1型感染的輔助診斷及流行病學調查。
【檢驗原理】
本試劑盒采用聚合酶鏈式反應(PCR)結合Taqman技術,對禽流感病毒H5N1亞型的特異性核酸片段進行熒光PCR檢測。
【主要成分】
組分成分 | 50人份/盒 | 主要成分 | |
規(guī)格 | 數(shù)量 | ||
PCR反應液 |
884μL /管 |
1管 | 引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、緩沖體系 |
酶混合液 | 156μL /管 | 1管 | Taq酶、MMLV酶 |
陽性對照 | 200μL /管 | 1管 | 含目的片段的質粒 |
陰性對照 | 500μL /管 | 1管 | 無核酸酶水 |
【儲存條件及有效期】
試劑置于-30~-15℃避光保存,有效期為12個月。本產(chǎn)品反復凍融應不超過5次。
【適用儀器】
熒光定量PCR儀:ABI 7500熒光PCR儀.;ABI Quantstudio5 ;Gentier 96R;SLAN-96P全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)。
【樣本要求】
1. 適用樣本
咽拭子:應使用專用采樣拭子,適度拭抹咽后壁和兩側扁桃體部位;迅速將拭子放入標本采集管中,旋緊管蓋并密封,以防干燥。
全血:疑似感染動物的靜脈血2mL至EDTA-2Na抗凝管,8000rpm離心2min,取適量上清液于1.5mL滅菌離心管中。
2. 樣本運輸和保存
上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6個月,標本運送應采用2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。
【檢驗方法】
1. 樣本處理
取待測樣本200ul,按照核酸提取試劑盒說明書進行核酸提取。
2. 試劑配置(在準備區(qū)進行,與擴增區(qū)分開,冰上操作)
注:試劑使用前要完全解凍,使用前渦旋混勻,10000 rpm離心5 s,確保試劑完全離心至管底,否則會出現(xiàn)裝量差異的現(xiàn)象。若有N個待檢測樣本,則需配置N+2擴增反應(待檢樣本數(shù)N+1個陽性質控品+1個陰性質控品),按下表要求進行擴增反應液的配制,配制完成后充分震蕩混勻,10000 rpm離心5 s。按每管20μL分裝至0.2 ml PCR管中,并做好標記,擴增反應液需現(xiàn)配現(xiàn)用。
N人份(μL) | |
PCR反應液 | (N+2)×17 |
酶混合液 | (N+2)×3 |
總量 | (N+2)×20 |
3. 加樣(在樣品處理區(qū)進行,冰上操作)
按陰性質控品、待測樣品、陽性質控品的加樣順序,分別取5μL,加入至已分裝擴增反應液的八聯(lián)管中,反應總體系為25μL。蓋緊管蓋,短暫離心后置于熒光定量PCR儀中,并記錄樣本擺放順序。
4. 擴增反應(在擴增區(qū)進行)
選擇FAM通道檢測H5亞型,選擇HEX通道檢測N1亞型。按以下擴增程序表設置PCR擴增參數(shù)。
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) | |
1 | 逆轉錄 | 50℃ | 10min | 1 |
2 | 預變性 | 95℃ | 3min | 1 |
3 | 變性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
4 | 退火延伸及熒光檢測 | 55℃ | 30 sec | |
報告熒光:FAM、HEX;淬滅熒光:NONE。 |
5.質量控制
FAM通道Ct值 | HEX通道Ct值 | |
陰性對照 | UNDET | UNDET |
陽性對照 | ≤35 | ≤35 |
以上要求需在同一次實驗中同時滿足,否則,本次實驗無效,需重新進行
6.結果判讀
反應結束自動保存結果,根據(jù)分析后圖像調節(jié)Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值(可以根據(jù)實際情況自行調整,Start 值可以在3~15、End 值可設在5~20,調整陰性對照的擴增曲線平直或低于閾值線),點擊Analysis 自動獲得分析結果,在Report 界面觀看結果。
試驗結果判斷
FAM通道 | HEX通道 | ||
Ct值>40 | Ct值≤40 | Ct值>40 | Ct值≤40 |
H5亞型陰性 | H5亞型陽性 | N1亞型陰性 | N1亞型 陽性 |
【檢驗結果的解釋】
1.實驗室環(huán)境污染,試劑污染,樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結果,如陰性對照檢測為陽性,則需做進一步實驗來確認是哪類污染。如為試劑污染,需開封新的試劑盒再次進行實驗;如為樣品交叉污染,應重復實驗;如為實驗室環(huán)境污染,需對實驗室進行徹底清潔或更換實驗室再進行實驗。
2.試劑運輸、保存或配制不當會引起試劑檢測性能下降,出現(xiàn)假陰性結果。如陽性對照檢測為陰性,應開封新的試劑盒再進行實驗。
【檢測方法的局限性】
1. 該試劑盒僅為定性產(chǎn)品,不做定量測定。
2. 當樣本的病毒含量低于最低檢出限時,可能會出現(xiàn)假陰性。陰性結果僅說明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測極限,但不能完全排除病毒感染的可能。
【產(chǎn)品性能指標】
1.準確性:企業(yè)陽性參考品檢測結果全部為陽性,陽性率為15/15。
2.最低檢測限:該試劑盒最低檢測限為500copies/mL。